Stanovení FreeLite Chains (FLC) nachází v klinické praxi stále širší uplatnění. Stává se vedle elektroforézy bílkovin séra a imunofixační elektroforézy součástí diagnostiky, prognostiky a monitorování terapie u monoklonálních gamapatií. Vlastní stanovení FLC má však zatím četná metodická úskalí a je snaha o jejich postupné odstranění. Touto snahou byly také vedeny Česká myelomová skupina a Česká společnost klinické biochemie, když organizovaly studii, při které šest laboratoří center léčby mnohočetného myelomu v České republice současně vyšetřilo 12 vzorků sér od nemocných monoklonálními gamapatiemi na stanovení FLC. Z této studie vyplývají tyto závěry: jednotlivé laboratoře sjednotí ředění sér podle pokynů výrobce, index kappa/lambda je stanovitelný s menší přesností, proto je doporučeno používat ve větší míře hodnot koncentrací FLC. Do kontrolního cyklu SEKK (www.sekk.cz) Gamapatie je od počátku roku 2010 pravidelně zařazováno stanovení FLC., Free monoclonal immunoglobulin light chains (FLC) quantification is recommended for diagnosis assessment and monitoring therapy for patients with monoclonal gammopathy. But there are numerous uncertainties regarding the detection, interpretation and FLC quantification. Our interlaboratory study showed that kappa/lambda ratio is strongly influenced by measurement errors and therefore we recommended the preferential use of FLC concentration values. Unified protocols are needed to minimise interlaboratory variability introduced by manual dilution or volume augmentation of clinical sample., Vávrová J., Tichý M., Friedecký B., Maisnar V., Hájek R., Čermáková Z., Dastych M., Gottwaldová J., Kučera P., Krotká J., Racek J., Ženková J., Schneiderka P., Lochman P., Büchler T., Zima T., Benáková H., Spáčilová J., Palička V., and Lit.: 14
Cíl: V rámci externí kontroly kvality SEKK, Gamapatie GP2/08 obdrželo 64 českých klinických laboratoří a 15 slovenských laboratoří vzorek moči od nemocné mnohočetným myelomem s Bence Jonesovou bílkovinou typu lambda. Metody: Laboratoře provedly typizaci paraproteinu v moči imunofi xací a stanovení celkové koncentrace bílkoviny v moči různými metodami, především turbidimetrií, metodou s pyrogallovou červení a s biuretovým činidlem. Výsledky: Získané výsledky byly významně rozdílné. Metodou vysokorozlišovací dvourozměrné elektroforézy s následným westernblottingem byly ve zkoumané moči prokázány především fragmenty lehkých řetězců lambda o molekulové hmotnosti 12 000 Da. Závěr: Stanovení koncentrace celkové bílkoviny v moči je z různých důvodů poměrně obtížné. Tato skutečnost je ještě zvýrazněna při přítomnosti fragmentů Bence Jonesovy bílkoviny v moči, jak prokázala i tato práce., Background: The optimal method for the measurement of urinary monoclonal free light chain (FLC) concentration has not been established. We have carried out an external quality control assessment with the participation of 79 clinical biochemistry laboratories from the Czech Republic and Slovakia. Methods: The laboratories received a reference urine sample obtained from a patient with multiple myeloma and lambda FLC proteinuria and were asked to type the paraprotein using immunofi xation and to measure total urinary protein using their established method, most commonly turbidimetry, pyrogallol red assay, and biuret assay. Results: There was a very wide inter-laboratory variability in the protein concentration readouts with up to three-fold difference in some cases. High-resolution two-dimensional electrophoresis showed that a high proportion of the urinary paraprotein was composed of lambda light chain fragments with molecular weight of 12 kDa. Conclusions: Our results highlight the challenges of reliable and reproducible measurement of urinary protein concentration in the presence of urinary FLCs., M. Tichý, V. Maisnar, J. Stulík, J. Vávrová, B. Friedecký, V. Palička, J. Špirková, L. Žaloudková, L. Hernychová, J. Spáčilová, T. Buchler, R. Hájek, and Lit.: 14
Cíl studie: Katecholaminy a jejich metabolity jsou využívány v diagnostice feochromocytomu. Naše sdělení se zabývá validací metody na stanovení normetanefrinu (NMN) a metanefrinu (MN) v plazmě a v moči. Název a sídlo pracoviště: Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF UK a FN v Hradci Králové. Materiál a metoda: Byla použita metoda HPLC s elektrochemickou detekcí (ED). Separační podmínky: mobilní fáze 1 mol/l NaH2PO4, 0,34 mmol/l 1-oktansulfonát sodný, 0,13 mmol/l EDTA, 75 ml/l acetonitril, analytická kolona C18 RP, průtok mobilní fáze 1 ml/min. Podmínky detekce (elektrochemický detektor ESA Coulochem II): ochranná cela s potenciálem 370 mV, analytická cela se 150 mV a -390 mV. Příprava vzorku: přídavek vnitřního standardu 4-hydroxy- -3-methoxy-benzylamoniumchloridu, izolace analytů a jejich přečištění extrakcí na pevné fázi s použitím SPE kolonek Oasis MCX, Waters (sorbent kondicionován metanolem a vodou, promýván 0,1 mol/l HCl a metanolem, eluce vzorku 5% metanolickým roztokem hydroxidu amonného). Výsledky: Průměrná opakovatelnost 7,4 % a reprodukovatelnost 8,0 %. Hodnoty výtěžnosti se pohybovaly v rozsahu 94–111 %. Ověření referenčních intervalů: NMN v plazmě 0,1–0,61 nmol/l, MN v plazmě 0,06–0,31 nmol/l, NMN v moči 0,480–2,400 µmol/24 h MN v moči 0,264–1,440 µmol/24 h. Závěry: Stanovení metanefrinů uvedenou metodou HPLC s elektrochemickou detekcí je rychlou a přesnou metodou pro stanovení metabolitů katecholaminů v plazmě a v moči., Objective: Catecholamines and their metabolites are used for diagnosis of pheochromocytoma. Our communication deals with validation of methods for determination of normetanephrine (NMN) and metanephrine (MN) in plasma and urine. Settings: Institute of Clinical Biochemistry and Diagnostics, Medical Faculty Hospital, Charles University, Hradec Kralové, Czech Republic Material and Methods: HPLC method with electrochemical detection (ED) was used. Separation conditions was as follows: mobile phase 1 mol/l NAH2PO4,0.34 mmol/l 1-octansulfonic acid sodium salt, 0.13 mmol/l EDTA, 75 ml/l acetonitrile, C18 RP analytical column, flow rate 1 ml/min. Detection conditions (electrochemical detector ESA Coulochem II): conditioning cell with potential 370 mV, analytical cell 150 and -390 mV. Sample preparation: addition of 4-hydroxy-3- -methoxy-benzylammoniumchloride as internal standard, isolation and purification were performed by solid-phase extraction (Oasis MCX, Waters). Sorbent was conditioned with methanol and water and washed by 0.1 mol/l HCl and methanol. For sample elution 5% ammonium hydroxide in methanol was used. Results: Average of repeatability 7.4% and reproducibility 8%. Recovery values ranged from 94–111%. We also calculated inter-in reference intervals. Plasma values were: 0.1–0.61 nmol/l for NMN and 0.06–0.31 nmol/l for MN. Urine values: 0.480–2.400 µmol/24 h for NMN and 0.264–1.440 µmol/24 h for MN. Conclusion: Rapid and precise method for determination of catecholamine metabolites in plasma and urine was successfully validated., Martina Ulrychová, Jaroslava Vávrová, Vladimír Palička, and Lit.: 9