Cíl studie: Katecholaminy a jejich metabolity jsou využívány v diagnostice feochromocytomu. Naše sdělení se zabývá validací metody na stanovení normetanefrinu (NMN) a metanefrinu (MN) v plazmě a v moči. Název a sídlo pracoviště: Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF UK a FN v Hradci Králové. Materiál a metoda: Byla použita metoda HPLC s elektrochemickou detekcí (ED). Separační podmínky: mobilní fáze 1 mol/l NaH2PO4, 0,34 mmol/l 1-oktansulfonát sodný, 0,13 mmol/l EDTA, 75 ml/l acetonitril, analytická kolona C18 RP, průtok mobilní fáze 1 ml/min. Podmínky detekce (elektrochemický detektor ESA Coulochem II): ochranná cela s potenciálem 370 mV, analytická cela se 150 mV a -390 mV. Příprava vzorku: přídavek vnitřního standardu 4-hydroxy- -3-methoxy-benzylamoniumchloridu, izolace analytů a jejich přečištění extrakcí na pevné fázi s použitím SPE kolonek Oasis MCX, Waters (sorbent kondicionován metanolem a vodou, promýván 0,1 mol/l HCl a metanolem, eluce vzorku 5% metanolickým roztokem hydroxidu amonného). Výsledky: Průměrná opakovatelnost 7,4 % a reprodukovatelnost 8,0 %. Hodnoty výtěžnosti se pohybovaly v rozsahu 94–111 %. Ověření referenčních intervalů: NMN v plazmě 0,1–0,61 nmol/l, MN v plazmě 0,06–0,31 nmol/l, NMN v moči 0,480–2,400 µmol/24 h MN v moči 0,264–1,440 µmol/24 h. Závěry: Stanovení metanefrinů uvedenou metodou HPLC s elektrochemickou detekcí je rychlou a přesnou metodou pro stanovení metabolitů katecholaminů v plazmě a v moči., Objective: Catecholamines and their metabolites are used for diagnosis of pheochromocytoma. Our communication deals with validation of methods for determination of normetanephrine (NMN) and metanephrine (MN) in plasma and urine. Settings: Institute of Clinical Biochemistry and Diagnostics, Medical Faculty Hospital, Charles University, Hradec Kralové, Czech Republic Material and Methods: HPLC method with electrochemical detection (ED) was used. Separation conditions was as follows: mobile phase 1 mol/l NAH2PO4,0.34 mmol/l 1-octansulfonic acid sodium salt, 0.13 mmol/l EDTA, 75 ml/l acetonitrile, C18 RP analytical column, flow rate 1 ml/min. Detection conditions (electrochemical detector ESA Coulochem II): conditioning cell with potential 370 mV, analytical cell 150 and -390 mV. Sample preparation: addition of 4-hydroxy-3- -methoxy-benzylammoniumchloride as internal standard, isolation and purification were performed by solid-phase extraction (Oasis MCX, Waters). Sorbent was conditioned with methanol and water and washed by 0.1 mol/l HCl and methanol. For sample elution 5% ammonium hydroxide in methanol was used. Results: Average of repeatability 7.4% and reproducibility 8%. Recovery values ranged from 94–111%. We also calculated inter-in reference intervals. Plasma values were: 0.1–0.61 nmol/l for NMN and 0.06–0.31 nmol/l for MN. Urine values: 0.480–2.400 µmol/24 h for NMN and 0.264–1.440 µmol/24 h for MN. Conclusion: Rapid and precise method for determination of catecholamine metabolites in plasma and urine was successfully validated., Martina Ulrychová, Jaroslava Vávrová, Vladimír Palička, and Lit.: 9
Cíl studie: Tato práce sleduje pacienty s akutním koronárním syndromem a k diagnostice akutního infarktu myokardu (AIM) využívá zcela nové technologie proteinových biočipů. Snahou je nejenom ohodnotit tuto novou možnost laboratorní diagnostiky AIM, ale také srovnání méně známých kardiomarkerů se standardními markery a posouzení jejich vztahu ke klinickým parametrům. Materiál a metody: Do studie bylo celkem zařazeno 44 pacientů s diagnózou AIM a krevní odběry byly prováděny v den přijetí, za 24 hodin a poté čtvrtý nebo pátý den hospitalizace. Z kardiomarkerů byl testován panel Cardiac Array (cTnI, CK MB, myoglobin, CAIII, FABP a GPBB) na biočipovém analyzátoru The Evidence InvestigatorTM od firmy Randox (Randox Laboratories Ltd., Velká Británie). Výsledky: Naše práce potvrdila těsný vztah FABP a GPBB k AIM a na základě jejich dynamiky je můžeme považovat za časné kardiomarkery. Zároveň jsme zjistili, že FABP má, stejně jako standardní marker CKMB nebo TnI, také prognostický význam - vyšší hodnoty jsou spojené se systolickou dysfunkcí. Také jsme poukázali na možnost využití biočipového analyzátoru při diagnostice AIM, kdy za poměrně krátký časový úsek získáme výsledky několika analytů najednou, které nám tak podají širší informace o probíhajícím AIM. Závěr: Metoda proteinových biočipů představuje v diagnostice AIM nový efektivní přístup, který ale jistě ke svému rozšíření vyžaduje řadu dalších studií., Objective: This study observes patients with acute coronary syndromes. To the diagnosis of acute myocardial infarction (AIM) we use the new proteins biochip technologies. The aim of this study is to evaluate the new strategy of laboratory diagnostic method and to confront the less known’s cardio markers with the standard markers and with the clinical parameters. Material and methods: This study contains 44 patients with AIM and the blood samples were taken in the time of the admission, 24 hours later and then the fourth or fifth day of hospitalization. We tested the cardiac panel Cardiac Array (cTnI, CK MB, myoglobin, CAIII, FABP and GPBB) on the biochip analyser The Evidence InvestigatorTM from Randox (Randox Laboratories Ltd., United Kingdom). Results: Our study confirms the close relationship between FABP and GPBB to AIM and we can consider these markers as early markers in the diagnosis of AIM. FABP has, as the standard markers CKMB or TnI, the prognostic value too (the higher values are associated with the systolic dysfunction). This study employs a new strategy of the biochip analyser in the diagnosis of AIM (in the same time we have the concentrations of more parameters and complex information about AIM). Conclusion: This method presents new interesting multianalytes approach to the diagnosis of the AIM. But this method requires a lot of further studies to verify this technology., Horáková L., Pudil R., Vašatová M., Tichý M., and Literatura
Cíl sdělení: Byly sledovány analytické a klinické vlastnosti technologie proteinových biočipů pro imunochemická stanovení kardiálních markerů a jejich možné využití v diagnostice infarktu myokardu. Metodika: Stanovení hladiny kardiálních markerů (CKMB, MYO, GPBB, H-FABP, CAIII a cTnI) bylo provedeno systémem Evidence Investigator (Randox). Pro jednotlivé kardiální markery stanovené panelem Cardiac Array byly hodnoceny analytické parametry testu. Kardiální markery byly stanoveny ve vzorcích sér 28 pacientů (21 mužů, 7 žen, věk 47–86 let) s diagnózou akutního infarktu myokardu. Výsledky a závěry: Mezilehlá přesnost pro všechny analyty, kromě myoglobinu, je ve shodě s výrobcem (CV < 10%). H-FABP i GPBB jsou časnými markery akutního infarktu myokardu, přičemž H-FABP má pravděpodobně vyšší diagnostickou senzitivitu než myoglobin. Dá se očekávat, že stanovení kardiálních markerů proteinovými biočipy do budoucna najde své uplatnění v biochemické diagnostice poškození myokardu., Objective: The analytical and clinical performance of protein biochip technology of immunochemical analysis of cardiac markers and their use in diagnosis of acute myocardial infarction were evaluated. Method: Determination of concentration of cardiac markers (CKMB, MYO, GPBB, H-FABP, CAIII and cTnI) was performed by system Evidence Investigator (Randox). Analytical parameters of Cardiac array were tested. Markers of myocardial injury were determined in group of the 28 patients (21 men, 7 women, age 47–86 years) with acute myocardial infarction diagnosis. Results and conclusions: Reproducibility of all tests agree with data of producer (CV < 10%), except myoglobin assay. New substances H-FABP and GPBB are promising early markers of acute myocardial infarction and diagnostic sensitivity of H-FABP would be better than myoglobin test. In future, determination of new cardiac markers by protein biochips technology probably will be used in cardiologic diagnosis., Ulrychová Martina, Horáková L., Tichý M., Horáček J. M., Pudil R., and Lit.: 11