Detekce DNA Borrelia burgdorferi sensu lato pomocí real-time PCR

Title:

Detekce DNA Borrelia burgdorferi sensu lato pomocí real-time PCR
Detekce DNA Borrelia burgdorferi sensu lato pomocí real-time PCR
Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato DNA by real-time PCR

Creator:

Bolehovská, Radka, Plíšková, Lenka, Plíšek, Stanislav, Honegr, Karel, Palička, Vladimír, and Čermáková, Zuzana

Contributor:

Bolehovská, Radka, Plíšková, Lenka, Plíšek, Stanislav, Honegr, Karel, Palička, Vladimír , 1946-, and Čermáková, Zuzana , 1958-

Identifier:

https://cdk.lib.cas.cz/client/handle/uuid:bmc07528785-fdddc6e4-e9d7-4259-ad6a-7178e27d842d
uuid:bmc07528785-fdddc6e4-e9d7-4259-ad6a-7178e27d842d
local:bmc07528785
http://www.cskb.cz/res/file/KBM-pdf/2009/1-09/2009-1-Bolehovska.pdf
local: bmc07528785

Subject:

lymeská nemoc--diagnóza, Borrelia burgdorferi--genetika--izolace a purifikace, biologický materiál - odběr a zpracování, in situ značení DNA s primerem, polymerázová řetězová reakce--metody, senzitivita a specificita, and lidé

Type:

model:article, article, Text, and TEXT

Description:

Cíl práce: 1. zavedení, optimalizace a validace polymerázové řetězové reakce v realném čase pro detekci DNA borélií včetně kontroly přítomnosti inhibitorů DNA polymerázy; 2. shrnutí dosavadních výsledků získaných pomocí zavedené metody. Materiál a metody: Izolace DNA byla prováděna pomocí komerčního kitu MagNA Pure Isolatin Kit III (Bacteria, Fungi) na automatickém izolačním přístroji MagNA Pure LC fi rmy Roche. Metoda byla koncipována jako multiplex real-time PCR s amplifi kací DNA borélií a koamplifi kací inhibiční kontroly v jedné zkumavce. Výsledky: Zavedená metoda byla plně optimalizována, validována a následně použita pro vyšetření 1822 materiálů, z toho 1151 likvorů, 609 krví a 62 jiných materiálů. Pouze 17 vzorků bylo pozitivních a 4 vzorky vykazovaly přítomnost inhibitorů DNA polymerázy. Závěr: Námi zavedená a validovaná metoda je velice rychlá, citlivá a specifi cká pro detekci DNA borélií. Přesto v diagnostice lymeské boreliózy není vždy stoprocentně spolehlivá a klinická korelace, stejně jako u jiných metod, není uspokojivá., Objective: The aims of our work were to introduction, optimization and validation of real-time PCR for detection Borrelia DNA including control of DNA polymerase inhibitors presence and summary of the results obtained by the new method. Material and methods: DNA was isolated by commercial kit MagNA Pure Isolatin Kit III (Bacteria, Fungi) on automatic isolation instrument MagNA Pure LC (Roche). The method is created as multiplex real-time PCR with Borrelia DNA amplifi cation and co-amplifi cation of inhibitor control in one tube. Results: Established method was optimised, validated and then used for analysis of 1,822 biological materials, of it 1,151 cerebrospinal fl uids, 609 blood samples and 62 other biological samples. Only 17 samples were positive and 4 samples contained inhibitors of DNA polymerase. Conclusion: The established and validated method is very fast, sensitive and specifi c for detection of Borrelia DNA. In spite of, Lyme borreliosis diagnostics is not always unimpeachable and clinical correlation is not satisfactory as well as other methods., Bolehovská R., Plíšková L., Plíšek S., Čermáková Z., Honegr K., Palička V., and Lit.: 13

Language:

Czech and English

Rights:

http://creativecommons.org/publicdomain/mark/1.0/
policy:public

Relation:

Klinická biochemie a metabolismus--MED00011026

Source:

Klinická biochemie a metabolismus : časopis České společnosti klinické biochemie | 2009 Volume:17 | Number:1

Harvested from:

CDK

Metadata only:

false

Date:

2009