Diabetic foot ulcer (DFU) is a serious complication of diabetes and hyperbaric oxygen therapy (HBOT) is also considered in comprehensive treatment. The evidence supporting the use of HBOT in DFU treatment is controversial. The aim of this work was to introduce a DFU model in ZDF rat by creating a wound on the back of an animal and to investigate the effect of HBOT on the defect by macroscopic evaluation, quantitative histological evaluation of collagen (types I and III), evaluation of angiogenesis and determination of interleukin 6 (IL6) levels in the plasma. The study included 10 rats in the control group (CONT) and 10 in the HBOT group, who underwent HBOT in standard clinical regimen. Histological evaluation was performed on the 18th day after induction of defect. The results show that HBOT did not affect the macroscopic size of the defect nor IL6 plasma levels. A volume fraction of type I collagen was slightly increased by HBOT without reaching statistical significance (1.35±0.49 and 1.94±0.67 %, CONT and HBOT, respectively). In contrast, the collagen type III volume fraction was ~120 % higher in HBOT wounds (1.41±0.81 %) than in CONT ones (0.63±0.37 %; p=0.046). In addition, the ratio of the volume fraction of both collagens in the wound ((I+III)w) to the volume fraction of both collagens in the adjacent healthy skin ((I+III)h) was ~65 % higher in rats subjected to HBOT (8.9±3.07 vs. 5.38±1.86 %, HBOT and CONT, respectively; p=0.028). Vessels density (number per 1 mm2 ) was found to be higher in CONT vs. HBOT (206.5±41.8 and 124±28.2, respectively, p<0.001). Our study suggests that HBOT promotes collagen III formation and decreases the number of newly formed vessels at the early phases of healing., Jiří Růžička, Martina Grajciarová, Lucie Vištejnová, Pavel Klein, Filip Tichánek, Zbyněk Tonar, Jiří Dejmek, Jiří Beneš, Lukáš Bolek, Robert Bajgar, Jitka Kuncová., and Obsahuje bibliografii
An atomic force microscopy (AFM) is used to the morphology imaging of tumour cell lines and processes taking place in a photo-dynamic therapy. The basic condition for a high-quality scan is a proper fixation of microscopic slides with no morphology destruction of whole cells and cell structures. A new microscopy development allows scanning in various media, e.g. liquids. For this purpose we use100 μm dry scanner and noncontact mode. As a biological material under study we examined cell lines A549 (bronchogenic carcinoma) and G361 (dermal melanoma). A cell scanning is limited by the apparatus design and therefore we use a combination of AFM and an inverse optical microscope. The aim of this work is a study of photo-dynamic effects on tumour cell lines using an atomic force microscope. The photo-dynamic effect is initialised by ClAlPcS2 sensitizers, the light source is LED diode emitting the wavelength 640 nm. A therapeutic effectiveness is detected with Synergy HT fluorescent reader together with a fluorescent marker CM-H2DCFDA. Thus we measure the kinetics of free radicals (ROS) production and ROS production after sample exposure 15 Jcm-2. Cells are imaged before and after photo-dynamic therapy (PDT) in two kind of picture: topography and phase imaging. From the results it can be concluded that before PDT the cells have smooth fine surfaces without pronounced roughness and after PDT the cells are cracked and it is possible to observe a manifestation of apoptis. and Mikroskopii atomárních sil (AFM) užíváme k zobrazení morfologie nádorových buněčných linií a procesů provázejících léčbu pomocí fotodynamické terapie. Základem získání kvalitního skenu je vhodná fixace preparátu, bez porušení morfologie celých buněk i jednotlivých buněčných struktur. Nové trendy v mikroskopii dávají možnost skenovat v různých prostředích, jako jsou například kapaliny. K získávání skenů užíváme 100mikrometrový suchý skener a nekontaktní mód. Jako biologický materiál jsme studovali buněčné linie A549 (bronchogenní karcinom) a G361 (kožní melanom). Skenování buněk je limitováno konstrukcí aparatury, proto užíváme kombinaci AFM a inverzního optického mikroskopu. Cílem práce je studium fotodynamického efektu na uvedených nádorových buněčných liniích pomocí mikroskopie atomárních sil. K navození fotodynamického jevu užíváme sensitizery ClAlPcS2 a zdrojem světla jsou LED diody vlnových délek 640 nm. Účinnost fotodynamické terapie detekujeme pomocí Synergy HT fluorescenčního readeru spolu s fluorescenční značkou CM-H2DCFDA. Měříme tak kinetiku produkce volných radikálů (ROS) a produkci ROS po dosažení dávky 15 Jcm-2. Zobrazujeme buňky před a po fotodynamické terapii (PDT) ve dvou typech zobrazení: topografie a fázové zobrazení. Z výsledků plyne zjištění, že před PDT mají buňky hladký jemný povrch bez větších nerovností a po PDT jsou buňky rozpraskané a je možné pozorovat projevy apoptózy.