Multiplexní analýza umožňuje současné stanovení více analytů v tomtéž vzorku. Tyto postupy, původně rozšířené především v genomice, nyní významně pronikají i do dalších oblastí bioanalytiky. V analýze proteinů hrají zásadní roli imunochemické metody a jejich multiplexace a miniaturizace je široce využitelná jak v základním, tak v aplikovaném výzkumu. Také možnosti uplatnění těchto vysokokapacitních metod v laboratorní diagnostice jsou značné. Text popisuje dva hlavní přístupy k multiplexní imunoanalýze – provedení v planárním a suspenzním uspořádání. Krátce diskutuje principy, detekční metody a přednosti obou těchto strategií. V závěru jsou zmíněna některá úskalí spojená s integrací multiplexní analýzy do diagnostiky., Multiplex analysis enables a simultaneous determination of multiple targets in one sample. This approach has been largely adopted in genomics and progressively expands to various domains of bioanalytics. In protein analysis, immunoassays play a fundamental role and their multiplexing and miniaturization is of great applicability to both basic and applied research. Furthermore, these high-throughput methodologies have a considerable potential in the field of laboratory diagnostics. The following text describes planar and bead-based arrays, two main strategies of immunoassay multiplexing. Principles, detection methods and strengths of each are shortly discussed. Finally, we mention several challenges linked with the integration of these methods to diagnostics., Vostrý M., and Lit.: 11
Průtoková cytometrie hraje významnou roli v charakterizaci krevních destiček a v analýze jejich funkcí ve vztahu k riziku trombózy a krvácení. V klinické praxi se uplatňuje v diagnostice vrozených poruch funkce destiček, imunitních a megakaryocytárních trombocytopenií, v analýze polymorfie systému lidských trombocytárních antigenů (HPA) ve vztahu k aloimunizaci, neonatální trombocytopenii, potransfuzní purpuře nebo refrakternosti na trombocytární přípravky. Klinicky významná je analýza aktivity cirkulujících destiček a stanovení trombocytárních mikročástic u pacientů s tranzitorní ischemickou atakou, akutním koronárním syndromem, kardiopulmonálním bypassem. V posledních letech se průtoková cytometrie uplatňuje úspěšně v měření účinnosti antiagregační léčby inhibitory receptoru P2Y12 a antagonisty komplexu IIb/IIIa. Relativním nedostatkem běžně používaných metod je nedostatečná standardizace a reprodukovatelnost. Cílem této práce je poskytnout přehled současných možností vyšetření krevních destiček a jejich funkcí metodou průtokové cytometrie v kontextu zavedených standardních postupů na našem pracovišti., Flow cytometry is a significant tool for platelet characterization and functional analysis in relation to the risk of bleeding and thrombosis. In clinical practice it is useful for the diagnosis of inherited platelet disorders, immune and megakaryocytic thrombocytopenias, for platelet HPA-1 polymorphism analysis in association with alloimmunization, neonatal alloimmune thrombocytopenia, post-transfusion purpura or refractoriness to platelet infusion. The analysis of platelet reactivity and platelet microparticles in patients with transitory ischemic attack, acute coronary syndrome or cardiopulmonary bypass is clinically significant. In recent years, flow cytometry plays an increasing role in monitoring of antiplatelet therapy with P2Y12 receptor inhibitors and IIb/IIIa antagonists. Relative limitation of the majority of methods in use is poor standardization and reproducibility. The aim of this work is to review the potential role of flow cytometry analysis of platelets and their function in the context of the standardized techniques adopted in our laboratory., Marinov I., Luxová A., Tkáčová V., and Lit.: 19